TGIF2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416231-ACT

ヒトTGIF2（TG-interacting factor 2）は、細胞運命の決定、増殖、分化を制御する遺伝子発現プログラムを調節するTALEクラスのホメオボックス型転写制御因子をコードします。TGIF2は主として転写コリプレッサーとして機能し、SMADタンパク質と協働してコリプレッサー複合体をリクルートすることで、TGF-β/SMADシグナル伝達の出力や、より広範な発生過程における転写ネットワークを形作ります。これらの相互作用を通じて、TGIF2は上皮間葉転換（EMT）関連プログラム、系譜（ライン）特異化、ならびに文脈依存的な増殖制御に影響します。TGIF2の発現や活性の破綻は、発生異常やがんで観察される転写状態の変化と関連づけられており、シグナル依存的な遺伝子制御の機構研究において重要な標的となっています。

TGIF2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TGIF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TGIF2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TGIF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTGIF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TGIF2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTGIF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTGIF2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTGIF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTGIF2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。