TGase6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404254-ACT

O gene humano **TGM6** codifica a transglutaminase 6 (TGase6), uma enzima dependente de Ca²⁺ que catalisa reações de ligação cruzada de proteínas e de transamidação, modulando a estabilidade proteica, a organização da matriz extracelular e a dinâmica do citoesqueleto. Ao regular interações proteína–proteína e modificações pós-traducionais, a TGase6 pode influenciar vias associadas à adesão celular, diferenciação e respostas ao estresse. A expressão de **TGM6** e a atividade da família das TGases têm sido estudadas no contexto da biologia neural e epitelial, em que alterações na homeostase das ligações cruzadas podem afetar a proteostase e a sinalização célula–matriz. A desregulação da TGase6 tem sido associada a fenótipos relevantes para a neurobiologia e a assinaturas moleculares ligadas a doenças, sustentando seu uso como alvo para estudos mecanísticos de controle transcricional e remodelamento de vias a jusante.

TGase6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGM6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGase6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGM6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGM6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGase6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGM6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGase6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGase6 em células tumorais com expressão de TGM6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.