TFPI-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423362

Visão geral

Tfpi2 codifica o inibidor 2 da via do fator tecidual (TFPI-2), um inibidor secretado de serinoproteases do tipo Kunitz que modula a proteólise extracelular ao inibir proteases como a plasmina e enzimas do tipo tripsina. Em tecidos murinos, o TFPI-2 ajuda a regular a renovação da matriz extracelular, a atividade de proteases pericelulares e as interações célula–matriz que influenciam a adesão, a migração e o remodelamento tecidual. Ao limitar cascatas proteolíticas ligadas à coagulação e à fibrinólise e ao interagir com o remodelamento mediado por metaloproteinases de matriz, o TFPI-2 contribui para a homeostase vascular e estromal. Alterações na expressão ou na atividade do TFPI-2 têm sido associadas à degradação desregulada da matriz e a fenótipos celulares invasivos relevantes para fibrose, patologia vascular e biologia do câncer.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TFPI-2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tfpi2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tfpi2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tfpi2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TFPI-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tfpi2 para a investigação da sinalização de TFPI-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tfpi2 críticos para a função TFPI-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tfpi2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TFPI-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TFPI-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tfpi2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TFPI-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TFPI-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tfpi2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tfpi2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.