TFIIIC110 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404261-ACT

GTF3C2 codifica a TFIIIC110, uma subunidade central do complexo TFIIIC que reconhece elementos promotores internos e sustenta a transcrição, pela RNA polimerase III, de tRNAs, 5S rRNA e outros pequenos RNAs não codificantes. Ao coordenar a montagem do TFIIIC e o acoplamento funcional ao recrutamento do TFIIIB, a TFIIIC110 contribui para a proteostase, a capacidade translacional e programas de adaptação ao estresse celular que dependem da produção da Pol III. Componentes do TFIIIC também participam da organização da cromatina e da arquitetura do genoma por meio da ligação a loci de genes de tRNA e a sítios regulatórios relacionados. Alterações no controle transcricional da Pol III e a desregulação de subunidades do TFIIIC têm sido associadas à sinalização proliferativa e a estados oncogênicos, motivando estudos mecanísticos de GTF3C2 na homeostase transcricional e na regulação gênica relevante para doenças.

TFIIIC110 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GTF3C2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TFIIIC110 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GTF3C2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GTF3C2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TFIIIC110. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GTF3C2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TFIIIC110 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TFIIIC110 em células tumorais com expressão de GTF3C2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.