TFIIIB90-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405826-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TFIIIB90-1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase TFIIIB90-1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase TFIIIB90-1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para BRF1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TFIIIB90-1/2/3/5 Anticorpo (A-8): sc-390821
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TFIIIB90-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405826-NIC | 20 µg | $410.00 |
BRF1 codifica a TFIIIB90-1, uma subunidade central do fator de transcrição TFIIIB da RNA polimerase III, que coopera com TBP e BDP1 para posicionar a Pol III em promotores de genes de tRNA, do rRNA 5S e de outros loci de pequenos RNAs não codificantes. Ao controlar o início da transcrição pela Pol III, a TFIIIB90-1 influencia a biogênese de ribossomos, a capacidade traducional e programas celulares de crescimento, conectando o sensoriamento de nutrientes e a regulação transcricional responsiva ao estresse à proliferação. A produção desregulada da Pol III e a atividade de componentes do TFIIIB têm sido associadas à transformação oncogênica e a alterações de proteostase em múltiplos contextos, tornando BRF1 um ponto útil para dissecar o controle transcricional de vias biossintéticas. Estudos funcionais de BRF1 comumente se cruzam com a regulação de cromatina em promotores da Pol III, a progressão do ciclo celular e a sinalização metabólica que modula o rendimento transcricional da Pol III.
TFIIIB90-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus BRF1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de BRF1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função BRF1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com BRF1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.