TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405826

概要

BRF1は、転写因子IIIBのサブユニットであるTFIIIB90-1をコードしており、tRNA、5S rRNA、その他の小型ノンコーディングRNAの転写に必要なRNAポリメラーゼIII（Pol III）転写開始機構の中核構成要素です。Pol IIIプロモーター上でTBPおよびBDP1と複合体を形成することで、TFIIIB90-1はクロマチンへの結合、転写開始前複合体の形成、ならびに細胞の翻訳能と増殖プログラムの制御を支えます。Pol IIIの転写産物量は栄養感知や増殖シグナルと密接に連動しており、BRF1の機能はリボソーム生合成、プロテオスタシス、ストレス適応と結び付いています。Pol III転写の異常やTFIIIB活性の変化は、過剰な生合成需要や細胞周期制御の破綻を特徴とする腫瘍性状態など、さまざまな疾患としばしば関連します。

TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBRF1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BRF1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BRF1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TFIIIB90-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TFIIIB90-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BRF1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TFIIIB90-1の機能に不可欠なBRF1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BRF1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTFIIIB90-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BRF1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TFIIIB90-1 HDRプラスミド（h）および TFIIIB90-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBRF1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBRF1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。