Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TFIIIB90-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405826
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TFIIIB90-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TFIIIB90-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TFIIIB90-1/2/3/5 Anticuerpo (A-8): sc-390821
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TFIIIB90-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405826 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
BRF1 codifica la subunidad TFIIIB90-1 del factor de transcripción IIIB, un componente central de la maquinaria de iniciación de la ARN polimerasa III, necesaria para la transcripción de ARNt, ARNr 5S y otros ARN pequeños no codificantes. Mediante su ensamblaje con TBP y BDP1 en los promotores de la Pol III, TFIIIB90-1 favorece la interacción con la cromatina, la formación del complejo de preiniciación y la regulación de la capacidad de traducción celular y de los programas de crecimiento. La producción de Pol III está estrechamente acoplada a la detección de nutrientes y a las señales proliferativas, lo que vincula la función de BRF1 con la biogénesis ribosomal, la proteostasis y la adaptación al estrés. La transcripción de Pol III desregulada y la actividad alterada de TFIIIB se asocian con frecuencia a estados oncogénicos y a otros trastornos caracterizados por una demanda biosintética aberrante y un control anómalo del ciclo celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TFIIIB90-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BRF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BRF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BRF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TFIIIB90-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BRF1 para la investigación de la señalización de TFIIIB90-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de BRF1 críticos para la función de TFIIIB90-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BRF1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BRF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TFIIIB90-1 (h) y el plásmido HDR TFIIIB90-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BRF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BRF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.