TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405826

Übersicht

BRF1 kodiert die TFIIIB90-1-Untereinheit des Transkriptionsfaktors IIIB, einer Kernkomponente der Initiationsmaschinerie der RNA-Polymerase III, die für die Transkription von tRNAs, 5S-rRNA und anderen kleinen nichtkodierenden RNAs erforderlich ist. Durch die Assemblierung mit TBP und BDP1 an Pol-III-Promotoren unterstützt TFIIIB90-1 die Chromatinbindung, die Bildung des Präinitiationskomplexes sowie die Regulation der zellulären Translationskapazität und von Wachstumsprogrammen. Die Pol-III-Output ist eng an Nährstoffsensorik und proliferative Signalwege gekoppelt und verknüpft die BRF1-Funktion mit Ribosomenbiogenese, Proteostase und Stressanpassung. Eine fehlregulierte Pol-III-Transkription und eine veränderte TFIIIB-Aktivität sind häufig mit onkogenen Zuständen und anderen Erkrankungen assoziiert, die durch einen abnormen biosynthetischen Bedarf und eine gestörte Zellzykluskontrolle gekennzeichnet sind.

Das TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BRF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BRF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BRF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TFIIIB90-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BRF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TFIIIB90-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BRF1-Exone abzielen, die für die TFIIIB90-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BRF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BRF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TFIIIB90-1 HDR-Plasmid (h) und TFIIIB90-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BRF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BRF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.