Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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TFIIIB′′ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436781
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TFIIIB″ O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TFIIIB″, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:BDP1 Anticorpo (B-6): sc-515058
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TFIIIB′′ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-436781 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Bdp1 codifica a subunidade TFIIIB″ do camundongo, um componente central da maquinaria de transcrição da RNA polimerase III que coopera com a TBP e as proteínas BRF para montar o TFIIIB em promotores da Pol III. O TFIIIB″ sustenta o início e a reiniciação da transcrição dependente da Pol III de tRNAs, rRNA 5S e outros pequenos RNAs não codificantes, vinculando a atividade de Bdp1 à capacidade de tradução, à proteostase e ao controle do crescimento celular. Como a produção da Pol III está intimamente acoplada ao sensoriamento de nutrientes e às respostas ao estresse, alterações em Bdp1 podem influenciar a progressão do ciclo celular e a adaptação metabólica. A transcrição desregulada pela Pol III e a função alterada do TFIIIB são frequentemente estudadas em contextos de distúrbios proliferativos e de vias de estabilidade genômica, tornando Bdp1 um alvo útil para estudos mecanísticos em células de mamíferos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TFIIIB″ (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Bdp1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Bdp1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Bdp1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TFIIIB″.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Bdp1 para a investigação da sinalização de TFIIIB″, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Bdp1 críticos para a função TFIIIB″
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Bdp1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TFIIIB″ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TFIIIB″ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Bdp1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TFIIIB″ Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TFIIIB″ (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Bdp1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Bdp1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.