Plasmide Double Nickase (h) TFIIH p89: sc-401124-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TFIIH p89 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TFIIH p89 Double Nickase (h) et le plasmide TFIIH p89 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ERCC3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TFIIH p89 Antibody (G-10): sc-271500
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TFIIH p89 | sc-401124-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TFIIH p89 | sc-401124-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC3 code pour TFIIH p89 (XPB), une ATPase dépendante de l’ADN et une hélicase 3′→5′, composant central du complexe TFIIH, qui couple l’initiation basale de la transcription par l’ARN polymérase II à la réparation par excision de nucléotides. En déroulant l’ADN des promoteurs et l’ADN contenant des lésions lors de la NER couplée à la transcription et de la NER du génome global, TFIIH p89 contribue à coordonner l’intégrité du génome, la progression du cycle cellulaire et les réponses aux dommages induits par les UV. La perturbation de la fonction d’ERCC3 dérègle l’homéostasie transcriptionnelle et la capacité de réparation de l’ADN, reliant les défauts d’ERCC3 à des syndromes héréditaires de réparation de l’ADN tels que le xeroderma pigmentosum et la trichothiodystrophie. En tant que composant de TFIIH, TFIIH p89 est fréquemment étudiée dans les mécanismes de régulation de la transcription, le stress réplicatif et les voies de mutagenèse.
TFIIH p89 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERCC3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERCC3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERCC3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERCC3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.