TFIIH p89 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401124-ACT

ERCC3は、ヒトTFIIH複合体のp89（XPB）ヘリカーゼをコードしており、ATP依存的にDNAを巻き戻す因子として、RNAポリメラーゼIIによる転写開始とヌクレオチド除去修復（NER）の双方に必須です。TFIIH複合体内でTFIIH p89は、転写時のプロモーター開裂を統括するとともに、かさ高いDNA付加体の除去における損傷の検証や病変部位の巻き戻しにも関与し、転写制御とゲノム維持を結び付けています。ERCC3を介する修復機構や転写共役プロセスの破綻は、遺伝毒性ストレスに対する過敏性や、色素性乾皮症およびトリコチオジストロフィーなどの症候群性疾患と関連しており、ERCC3はDNA損傷応答と転写の完全性を研究するうえで重要な結節点となっています。

TFIIH p89 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ERCC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TFIIH p89 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ERCC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はERCC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TFIIH p89の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のERCC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTFIIH p89依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびERCC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTFIIH p89経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。