TET1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400845

Visão geral

A TET1 (ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 1) é uma dioxigenase dependente de Fe(II)/2-oxoglutarato que catalisa a oxidação da 5-metilcitosina em 5-hidroximetilcitosina e em derivados posteriormente oxidados, sustentando a desmetilação ativa do DNA e a remodelação epigenética. Por meio de interações com reguladores transcricionais e complexos associados à cromatina, a TET1 ajuda a moldar os estados de metilação de promotores e enhancers que influenciam a identidade celular, a diferenciação e a estabilidade do genoma. Alterações nas paisagens de 5hmC ligadas à TET1 têm sido associadas a programas desregulados de expressão gênica em contextos de câncer e de neurodesenvolvimento, e são frequentemente estudadas em conjunto com outras máquinas de metilação do DNA, como as DNMTs e vias metabólicas dependentes de IDH. Como uma interface “writer/eraser” epigenética, a TET1 é amplamente utilizada para investigar o controle dependente de metilação de redes de sinalização e da transcrição específica de linhagem.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TET1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TET1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TET1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TET1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TET1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TET1 para a investigação da sinalização de TET1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TET1 críticos para a função TET1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TET1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TET1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TET1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TET1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TET1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TET1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TET1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TET1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.