Plasmide CRISPR/Cas9 KO Testican-1 (h): sc-406915

Présentation

SPOCK1 code la testicane-1, un protéoglycane sécrété de la matrice extracellulaire appartenant à la famille SPARC, qui module les interactions cellule–matrice et la protéolyse péricellulaire. La testicane-1 peut influencer le remodelage extracellulaire en interagissant avec des composants à base d’héparane/chondroïtine sulfate et en régulant l’activité des protéases, ce qui affecte l’adhérence cellulaire, la migration et l’organisation tissulaire. Par le biais de ces processus dépendants de la matrice extracellulaire, SPOCK1 a été étudié dans des contextes de comportement cellulaire invasif, de remodelage du stroma et de microenvironnements inflammatoires. Une expression dérégulée de SPOCK1 a été rapportée dans de multiples types de tumeurs ainsi que dans des pathologies fibrosantes ou associées au remodelage, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier des phénotypes pilotés par le microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Testican-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPOCK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPOCK1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPOCK1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Testican-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPOCK1 pour l'étude de la signalisation de Testican-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPOCK1 essentiels à la fonction de Testican-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPOCK1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Testican-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Testican-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPOCK1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Testican-1 plasmide HDR (h) et le Testican-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPOCK1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPOCK1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.