Plásmido CRISPR de Activación (h) Teneurin-1: sc-408663-ACT

El gen humano TENM1 codifica la teneurina-1, una gran glicoproteína transmembrana de tipo II enriquecida en el sistema nervioso que media la adhesión célula-célula y la señalización dependiente de contacto durante la guía axonal, la organización sináptica y la formación de circuitos neuronales. La teneurina-1 participa en interacciones con la matriz extracelular y en programas de reconocimiento transináptico que moldean el crecimiento de las neuritas y la conectividad, integrándose con redes de señalización del desarrollo que regulan la remodelación del citoesqueleto y el estado transcripcional. Alteraciones genéticas y de expresión en TENM1 se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con la biología tumoral, lo que respalda su relevancia en estudios de diferenciación neuronal, migración y comunicación celular aberrante. Estas propiedades hacen de TENM1 una diana útil para desentrañar las vías que gobiernan el desarrollo neural y los cambios relevantes para la enfermedad en la adhesión y la señalización celulares.

Teneurin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TENM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Teneurin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TENM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TENM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Teneurin-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TENM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Teneurin-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Teneurin-1 en células tumorales con expresión de TENM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.