TEM8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-404903-ACT-2

O gene humano ANTXR1 codifica o marcador endotelial tumoral 8 (TEM8), um receptor de toxina do antraz presente na superfície celular que atua como proteína de adesão e de interação com a matriz, estando implicado no comportamento das células endoteliais e na remodelação tecidual. O TEM8 liga-se a componentes da matriz extracelular e contribui para a organização do citoesqueleto e para a endocitose mediada por receptores, conectando a atividade de ANTXR1 a programas angiogênicos e à sinalização do microambiente. Estudos genéticos e funcionais associam ANTXR1 a fenótipos do desenvolvimento vascular e à desregulação da matriz extracelular, com relevância para a vasculatura associada a tumores e para distúrbios que afetam a homeostase do tecido conjuntivo. A edição gênica de ANTXR1 permite a investigação mecanística de vias de tráfego e adesão dependentes de TEM8, a análise das interações entre endotélio e matriz e o desenvolvimento de modelos celulares isogênicos para estudos de vias e de genômica funcional.

TEM8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANTXR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TEM8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANTXR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANTXR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TEM8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANTXR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TEM8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TEM8 em células tumorais com expressão de ANTXR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.