TEM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407178

概要

ADGRA2（TEM5）は、細胞外領域が大きい接着型Gタンパク質共役受容体をコードしており、細胞―細胞および細胞―細胞外マトリックス間の相互作用を支えるとともに、細胞外の刺激を細胞内シグナル伝達へと結び付けます。接着型GPCRファミリーの一員として、TEM5は、内皮細胞の挙動、血管および組織のリモデリング、ならびにGPCR連関経路を介した細胞骨格組織化の制御といったプロセスに関与するとされています。TEM5の発現は、腫瘍関連血管や間質のリモデリングに関係する状況で報告されており、血管新生シグナルや微小環境の制御に関する研究において注目されています。ADGRA2の機能を解析することは、接着型GPCRシグナルが、細胞外の接着ダイナミクスをヒト細胞における転写応答および細胞骨格応答とどのように統合しているのかを明らかにする助けとなります。

TEM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるADGRA2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ADGRA2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ADGRA2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TEM5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TEM5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ADGRA2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TEM5の機能に不可欠なADGRA2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ADGRA2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TEM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTEM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ADGRA2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TEM5 HDRプラスミド（h）および TEM5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはADGRA2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のADGRA2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。