Plasmide CRISPR/Cas9 KO Telethonin (h): sc-402317

Présentation

TCAP code la téléthonine, une protéine du disque Z qui se lie à la titine (TTN) et contribue à l’assemblage des sarcomères, à la mécanoperception et à la stabilité structurelle du muscle strié. La téléthonine participe à des réseaux de signalisation dépendants de la tension, reliant l’appareil contractile aux voies de contrôle de la qualité des protéines, notamment le renouvellement via le système ubiquitine–protéasome et le remodelage en réponse au stress. La perturbation de TCAP altère l’intégrité myofibrillaire et a été associée, dans des études génétiques et fonctionnelles, à des cardiomyopathies héréditaires et à des phénotypes de dystrophie musculaire. En tant qu’échafaudage spécifique du muscle, la téléthonine est largement étudiée dans la différenciation des cardiomyocytes, le maintien des sarcomères et l’adaptation au stress biomécanique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Telethonin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TCAP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TCAP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TCAP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Telethonin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TCAP pour l'étude de la signalisation de Telethonin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TCAP essentiels à la fonction de Telethonin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TCAP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Telethonin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Telethonin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TCAP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Telethonin plasmide HDR (h) et le Telethonin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TCAP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TCAP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.