TCP-1 γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403203

Visão geral

CCT3 codifica a subunidade gama da chaperonina humana contendo TCP-1 (TCP-1 γ), um componente central do complexo citosólico TRiC/CCT que promove, de forma dependente de ATP, o dobramento de um amplo conjunto de proteínas clientes. O TRiC/CCT sustenta a proteostase ao auxiliar a maturação de proteínas do citoesqueleto, como actina e tubulina, e ao influenciar o dobramento e a estabilidade de reguladores de sinalização e do ciclo celular. Por meio dessas funções, a TCP-1 γ contribui para a organização do citoesqueleto, o controle de qualidade proteica e a capacidade proliferativa, sendo que alterações na função da chaperonina estão associadas a estresse proteotóxico e a mudanças na sinalização de crescimento. Foi relatada expressão desregulada de subunidades CCT em diversos contextos de doença, o que reforça seu estudo em vias relevantes para a transformação oncogênica e para o mau dobramento de proteínas associado à neurodegeneração.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TCP-1 γ (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CCT3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CCT3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CCT3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TCP-1 γ.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CCT3 para a investigação da sinalização de TCP-1 γ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CCT3 críticos para a função TCP-1 γ
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CCT3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TCP-1 γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TCP-1 γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CCT3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TCP-1 γ Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TCP-1 γ (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CCT3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CCT3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.