TBX2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403078-ACT

TBX2は、保存されたT-boxドメインを介してDNAに結合し、発生に関わる遺伝子プログラムや細胞運命決定を協調的に制御するT-boxファミリー転写因子をコードします。ヒト細胞では、TBX2は増殖、老化（senescence）の回避、系譜指定を制御する転写ネットワークを調節し、細胞周期レギュレーターや分化関連経路を修飾する役割が報告されています。TBX2の異常発現は、複数の組織コンテキストにおける成長制御の破綻や発生パターン形成の変化と関連しており、細胞アイデンティティの転写制御を研究する上で有用なノードとなります。TBX2を実験的に操作することで、がん遺伝子性の転写プログラム、上皮―間葉ダイナミクス、発生シグナル間のクロストークに関する機構研究が可能になります。

TBX2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TBX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TBX2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TBX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTBX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TBX2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTBX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTBX2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTBX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTBX2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。