TBR-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402507-ACT

TBR1 codifica o fator de transcrição da família T-box TBR-1, um regulador nuclear com papéis essenciais na diferenciação de neurônios corticais, na migração neuronal e no estabelecimento da conectividade corticotalâmica durante o neurodesenvolvimento humano. O TBR-1 modula programas de expressão gênica a jusante de sinais do desenvolvimento e de redes transcricionais, incluindo interações com fatores envolvidos na especificação da linhagem glutamatérgica e na maturação sináptica. A desregulação da expressão ou da função de TBR1 tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento, com associações recorrentes ao transtorno do espectro autista e a comprometimentos cognitivos e de fala relacionados, por meio da alteração na formação de circuitos neuronais. Como um nó de via que controla a identidade e a conectividade neuronais, o TBR-1 é amplamente estudado quanto aos mecanismos de controle transcricional em sistemas neurais em desenvolvimento e maduros.

TBR-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TBR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TBR-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TBR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TBR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TBR-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TBR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TBR-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TBR-1 em células tumorais com expressão de TBR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.