TARC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422837

Descripción general

Ccl17 codifica la quimiocina regulada por el timo y la activación (TARC/CCL17), una quimiocina CC secretada que se une a CCR4 para dirigir la quimiotaxis de subpoblaciones de células T positivas para CCR4, incluidas las células Th2 y las células T reguladoras. En los tejidos inmunitarios del ratón, TARC contribuye al tráfico de leucocitos, moldeando la composición y la polarización de los infiltrados inflamatorios y coordinando las respuestas impulsadas por antígenos. La expresión de Ccl17 se induce comúnmente aguas abajo de la señalización por citocinas y de la activación de receptores de reconocimiento de patrones en compartimentos mieloides y estromales, conectando señales innatas con el reclutamiento de células adaptativas. La desregulación de la señalización Ccl17/TARC se asocia con inflamación de tipo alérgico y patología mediada por el sistema inmunitario, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar gradientes de quimiocinas, inflamación de barrera y la comunicación cruzada entre células T y células mieloides.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TARC (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccl17 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccl17 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccl17 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TARC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccl17 para la investigación de la señalización de TARC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ccl17 críticos para la función de TARC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccl17 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TARC CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TARC CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccl17. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TARC (m) y el plásmido HDR TARC (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccl17 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccl17 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.