Tak1L CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406747-ACT

MAP3K7CL は、TAK1/MAP3K7 シグナル伝達モジュールに関連する、MAP キナーゼキナーゼキナーゼ様タンパク質 Tak1L をコードします。この系に属するタンパク質は、上流からの刺激を下流のキナーゼカスケードへ結び付ける役割を担い、NF-κB および MAPK 経路の制御に関与するものとして知られています。その結果、炎症シグナル、ストレス応答、そして状況依存的な転写プログラムの制御が形作られます。MAP3K7CL は典型的な TAK1 と比べて解析が十分ではないものの、MAP3K ファミリー因子との類似性から、キナーゼネットワークの配線、経路の冗長性、代償的シグナル伝達を検討するうえで重要です。TAK1 関連シグナルの破綻は、免疫・炎症表現型やがんに関連するシグナル状態と結び付けられており、疾患関連の細胞モデルにおける MAP3K7CL の機能を探索的に調べる研究を後押しします。

Tak1L CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAP3K7CLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tak1L CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAP3K7CL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAP3K7CL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tak1Lの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAP3K7CL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTak1L依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAP3K7CL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTak1L経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。