T-bet/TBX21 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400480-ACT

TBX21 codifica o T-bet, um fator de transcrição da família T-box que atua como regulador mestre da diferenciação imune do tipo 1. O T-bet integra sinais de citocinas e do TCR para moldar a acessibilidade da cromatina e os programas transcricionais que controlam o IFNG e outros genes associados a Th1, influenciando a maturação de células NK e a função efetora citotóxica. Por meio de interações de regulação cruzada com fatores definidores de linhagem, o TBX21 ajuda a equilibrar a polarização Th1 versus Th2/Th17 e coordena respostas a jusante das vias IL-12/STAT4 e IFN/STAT1. A atividade desregulada de TBX21 tem sido associada à inflamação mediada pelo sistema imune, à suscetibilidade a infecções e à vigilância imunológica antitumoral alterada, tornando-o um alvo valioso para estudos mecanísticos de imunopatologia.

T-bet/TBX21 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TBX21 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

T-bet/TBX21 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TBX21 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TBX21, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de T-bet/TBX21. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TBX21 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de T-bet/TBX21 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via T-bet/TBX21 em células tumorais com expressão de TBX21 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.