SZT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411718

Descripción general

SZT2 (umbral convulsivo 2) codifica una gran proteína citosólica que actúa como regulador negativo de la señalización de mTORC1 a través del complejo KICSTOR, conectando la disponibilidad de nutrientes y aminoácidos con el control lisosomal de la actividad de mTORC1. Al limitar la activación de mTORC1, SZT2 ayuda a mantener la homeostasis celular en procesos como la autofagia, el metabolismo y las señales de crecimiento. La alteración de SZT2 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y encefalopatías epilépticas, en consonancia con una detección de nutrientes alterada y la desregulación de la vía de mTOR en neuronas. En consecuencia, SZT2 se investiga con frecuencia en modelos de excitabilidad neuronal, señalización asociada a lisosomas y respuestas al estrés dependientes de mTORC1.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SZT2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SZT2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SZT2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SZT2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SZT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SZT2 para la investigación de la señalización de SZT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SZT2 críticos para la función de SZT2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SZT2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SZT2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SZT2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SZT2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SZT2 (h) y el plásmido HDR SZT2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SZT2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SZT2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.