Syntaxin 17 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403251-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Syntaxin 17 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Syntaxin 17ダブルニカースプラスミド（h）およびSyntaxin 17ダブルニカースプラスミド（h2）は、STX17を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Syntaxin 17 抗体 (A-11): sc-518187
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Syntaxin 17 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403251-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Syntaxin 17 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403251-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STX17は、ER（小胞体）にアンカーされたSNAREであるSyntaxin 17をコードしており、ミトコンドリア関連膜（MAM）やオートファゴソームに局在して、オートファゴソームとリソソームの融合を促進することでオートファジー後期段階を仲介します。STX17はSNAP29およびVAMP8との相互作用を通じて、オートファジー・フラックス、オルガネラの品質管理、栄養ストレスへの細胞適応を支え、その下流でミトコンドリア恒常性や自然免疫シグナル伝達にも影響を及ぼします。STX17依存的な輸送やオートファジーの攪乱は、ミトファジーの変化やプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の破綻と関連づけられており、これらは神経変性、がん細胞のストレス耐性、炎症性表現型に関わる過程として重要です。膜融合と選択的オートファジーの接点に位置する因子として、STX17はリソソーム機能、ミトコンドリアのターンオーバー、ストレス下での細胞生存を制御する経路で頻繁に研究されています。
Syntaxin 17 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における STX17 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、STX17内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、STX17の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、STX17が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。