Syntaxin 17 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403251-ACT

STX17は、SNAREファミリータンパク質であるSyntaxin 17をコードしており、小胞体およびミトコンドリア関連膜（MAM）に局在し、細胞恒常性の中核となる膜融合イベントを支えます。Syntaxin 17はオートファゴソーム‐リソソーム融合の主要メディエーターであり、分解コンパートメントへのカーゴ輸送と連動して、オートファジーおよびマイトファジーの後期過程を協調的に制御します。小胞輸送とオルガネラ品質管理における役割を通じて、STX17は、ミトコンドリア機能と交差するプロテオスタシス、ストレス適応、代謝シグナル伝達経路に影響を及ぼします。Syntaxin 17が関与するオートファジーおよびミトコンドリア除去経路の破綻は、神経変性、感染生物学、がんに関連する細胞ストレス表現型に広く関与すると考えられており、STX17発現制御の機構研究が動機づけられています。

Syntaxin 17 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STX17の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Syntaxin 17 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STX17 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTX17転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Syntaxin 17の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTX17遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSyntaxin 17依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTX17発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSyntaxin 17経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。