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Synaptotagmin I慢病毒激活颗粒(m) | sc-423243-LAC | 200 µl | $455.00 |
Syt1 编码突触结合蛋白 I(synaptotagmin I),这是一种可结合 Ca2+ 的膜蛋白,在突触前末梢中充当快速、同步神经递质释放的主要传感器。突触结合蛋白 I 通过将 Ca2+ 内流与 SNARE 介导的突触小泡停靠与融合相耦联,调控小泡胞吐、短时程突触可塑性以及活动依赖性的膜转运。Syt1 的活性与突触前钙信号及小泡回收通路紧密整合,共同塑造神经元间通信与网络兴奋性。突触小泡释放机制(包括依赖突触结合蛋白 I 的步骤)的失调,常在神经发育与神经退行性表型的机制研究中被提及。
Synaptotagmin I 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Syt1 表达。
Synaptotagmin I 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Syt1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性Synaptotagmin I表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Syt1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。