Synapsin IIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423234

概要

Syn2は、シナプス小胞およびアクチンと結合するシナプス前終末のリン酸化タンパク質であるシナプシンIIaをコードしており、小胞のクラスター形成、リザーブプールの維持、ならびに活動依存的な神経伝達物質放出の調節に関与します。シナプシンIIaは、PKA、CaMKII、MAPK/ERKなどを含む神経細胞シグナル伝達カスケードの下流でのリン酸化によって制御され、カルシウム流入やセカンドメッセンジャー経路をシナプス可塑性へと結び付けます。マウス神経系モデルでは、シナプシン機能の変化が、興奮—抑制バランス、ネットワーク同期、シナプス成熟の変化を調べるために用いられており、これらは神経発達および神経精神疾患の表現型と関連します。Syn2の破壊は、回路の安定性や刺激誘発性のシナプス伝達に影響するシナプス前機構を解析するための扱いやすいアプローチを提供します。

Synapsin IIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSyn2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Syn2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Syn2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Synapsin IIaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Synapsin IIaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Syn2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Synapsin IIaの機能に不可欠なSyn2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Syn2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Synapsin IIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSynapsin IIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Syn2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Synapsin IIa HDRプラスミド（m）および Synapsin IIa HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSyn2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSyn2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。