Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423233

概要

Syn1は、シナプス小胞およびアクチン細胞骨格と結合する神経細胞特異的リン酸化タンパク質であるシナプシンIa/bをコードし、小胞のクラスター形成、リザーブプールの維持、ならびに活動依存的な神経伝達物質放出を制御します。シナプシンIa/bはカルシウム依存性およびcAMP依存性のリン酸化カスケードによって調節され、神経活動（発火）をシナプス小胞の動員とシナプス前可塑性に結び付けます。これらの過程を通じて、Syn1は回路の成熟、シナプスの安定性、中枢神経系における情報処理を形作る短期シナプス可塑性に寄与します。シナプシンのシグナル伝達の異常は、神経発達および精神神経疾患様の表現型に関与するとされ、発作感受性やシナプス機能不全との関連で広く研究されています。

Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSyn1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Syn1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Syn1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Synapsin Ia/bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Synapsin Ia/bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Syn1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Synapsin Ia/bの機能に不可欠なSyn1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Syn1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSynapsin Ia/b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Syn1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Synapsin Ia/b HDRプラスミド（m）および Synapsin Ia/b HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSyn1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSyn1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。