SUZ12 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401551-ACT

SUZ12はポリコーム抑制複合体2（PRC2）の中核構成因子をコードしており、EZH2およびEEDと協調してH3K27メチル化を介し、抑制的なクロマチン状態の確立と維持に関与します。クロマチンのアクセス性を調節することで、SUZ12は系譜決定、細胞周期制御、発生関連遺伝子ネットワークを制御する、安定した転写サイレンシング・プログラムに寄与します。SUZ12が関与するPRC2活性の変化は、複数のがんの文脈や神経発達表現型におけるエピジェネティック制御の破綻と関連づけられており、クロマチンリモデリングと転写恒常性の研究における重要な結節点となっています。SUZ12依存的な抑制は、遺伝子発現全体に広範な影響を及ぼすことで、分化・増殖・DNA損傷応答を制御する経路とも交差します。

SUZ12 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SUZ12の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SUZ12 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SUZ12 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSUZ12転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SUZ12の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSUZ12遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSUZ12依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSUZ12発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSUZ12経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。