SURF-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423223

Panoramica

Surf6 codifica SURF-6, una proteina nucleolare conservata implicata nella biogenesi dei ribosomi e nell’omeostasi del nucleolo attraverso ruoli nella lavorazione del pre-rRNA e nella maturazione delle subunità ribosomali. SURF-6 partecipa a processi di legame all’RNA e di organizzazione nucleolare che coordinano la capacità di sintesi proteica con i programmi di crescita e proliferazione cellulare. L’alterazione della funzione nucleolare e della produzione di ribosomi è strettamente collegata alle risposte cellulari allo stress, a cambiamenti nella traduzione e a difetti di proliferazione, rendendo Surf6 rilevante per studi sulla stabilità del genoma e sul controllo della crescita nei sistemi mammiferi. Nei modelli murini, la perturbazione di Surf6 offre un punto di ingresso sperimentalmente gestibile per indagare come la biogenesi dei ribosomi si intersechi con fenotipi dello sviluppo e con la disregolazione, associata a patologie, delle vie nucleolari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Surf6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Surf6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Surf6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SURF-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Surf6 per lo studio della segnalazione di SURF-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Surf6 critici per la funzione di SURF-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Surf6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SURF-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SURF-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Surf6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SURF-6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SURF-6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Surf6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Surf6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.