SURF-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423221

概要

Surf4は、COPII依存性の輸送を介して小胞体（ER）からゴルジ体へ分泌タンパク質を選択的に輸送する過程に関与する、ER膜のカーゴ受容体SURF-4をコードします。SURF-4は、ER内保持と順行輸送のバランスを調節することでプロテオスタシスに寄与し、その結果、分泌効率やミスフォールドタンパク質に対する細胞応答に影響を与えます。マウスの系では、Surf4の機能は脂質の取り扱い、細胞外タンパク質量、ERストレスシグナル伝達を制御する経路と交差しており、代謝制御や分泌経路の恒常性に関する研究において重要です。SURF-4介在性輸送の攪乱は、分泌異常が細胞機能障害や疾患関連表現型につながる機構をモデル化するために用いられます。

SURF-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSurf4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Surf4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Surf4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SURF-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SURF-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Surf4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SURF-4の機能に不可欠なSurf4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Surf4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SURF-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSURF-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Surf4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SURF-4 HDRプラスミド（m）および SURF-4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSurf4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSurf4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。