Superoxide Dismutase 3/SOD3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402505-ACT

O SOD3 humano codifica a superóxido dismutase extracelular 3, uma metaloenzima secretada dependente de Cu/Zn que catalisa a dismutação do ânion superóxido em peróxido de hidrogênio e oxigênio no espaço extracelular e na matriz perivascular. Ao limitar as espécies reativas de oxigênio e preservar a biodisponibilidade de óxido nítrico, a SOD3 influencia a homeostase redox, a sinalização endotelial e vias de remodelamento da matriz extracelular. Alterações na expressão ou na atividade de SOD3 têm sido associadas a mecanismos mediados por estresse oxidativo implicados na fisiopatologia cardiovascular e pulmonar, em lesão tecidual inflamatória e na dinâmica do microambiente tumoral. Como um antioxidante extracelular fundamental, a SOD3 é comumente estudada em contextos como biologia vascular, fibrose, tráfego de células imunes e programas transcricionais regulados por redox.

Superoxide Dismutase 3/SOD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOD3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Superoxide Dismutase 3/SOD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOD3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOD3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Superoxide Dismutase 3/SOD3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOD3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Superoxide Dismutase 3/SOD3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Superoxide Dismutase 3/SOD3 em células tumorais com expressão de SOD3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.