Superoxide Dismutase 2/SOD2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400230-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Superoxide Dismutase 2/SOD2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Superoxide Dismutase 2/SOD2ダブルニカースプラスミド（h）およびSuperoxide Dismutase 2/SOD2ダブルニカースプラスミド（h2）は、SOD2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Superoxide Dismutase 2/SOD2 抗体 (E-10): sc-137254
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Superoxide Dismutase 2/SOD2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400230-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Superoxide Dismutase 2/SOD2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400230-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトSOD2は、酸化的リン酸化によって産生されるスーパーオキシドラジカルに対する主要な酵素的防御機構である、ミトコンドリア局在のマンガン型スーパーオキシドジスムターゼをコードしています。SOD2はスーパーオキシドを過酸化水素へ変換することでミトコンドリアのレドックス恒常性の維持に寄与し、電子伝達系の機能を支えるとともに、mtDNA、タンパク質、脂質に対する酸化損傷を抑制します。SOD2の活性は、NRF2により制御される解毒機構や、マイトファジーやアポトーシスシグナル伝達などのミトコンドリア品質管理プロセスを含む抗酸化・ストレス応答経路と連携しています。SOD2の発現異常または活性低下は、がん代謝、神経変性、心筋症、炎症性疾患で観察される酸化ストレス表現型と関連しており、ミトコンドリア機能障害の機序研究における一般的な標的となっています。
Superoxide Dismutase 2/SOD2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SOD2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SOD2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SOD2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SOD2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。