SUMO-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431342-ACT

O gene murino Sumo2 codifica a SUMO-2, um modificador do tipo ubiquitina que é conjugado covalentemente a resíduos de lisina em proteínas-alvo para regular a localização, a estabilidade e as interações proteína–proteína. A conjugação por SUMO-2/3 é rapidamente induzida por estresse celular e coordena a organização nuclear, a sinalização e o reparo de danos ao DNA, o remodelamento da cromatina, o controle transcricional e a progressão do ciclo celular. Por meio de SUMOilação e deSUMOilação dinâmicas, a SUMO-2 modula vias que incluem manutenção do genoma, proteostase e respostas inatas ao estresse. A desregulação de modificações dependentes de SUMO-2 tem sido associada a respostas alteradas ao estresse genotóxico, a programas transcricionais aberrantes e a fenótipos relevantes para doenças, estudados em biologia do câncer e em modelos de neurodegeneração.

SUMO-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sumo2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SUMO-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sumo2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sumo2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SUMO-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sumo2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SUMO-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SUMO-2 em células tumorais com expressão de Sumo2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.