SULT1A3/1A4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417824-ACT

As SULT1A3/1A4 humanas codificam sulfotransferases citosólicas estreitamente relacionadas que catalisam a conjugação com sulfato de catecolaminas e outras monoaminas fenólicas, moldando o equilíbrio entre metabólitos bioativos e inativados. Ao gerar produtos sulfatados, SULT1A3/1A4 participam do metabolismo de xenobióticos de fase II e se conectam à renovação de neurotransmissores e à homeostase redox celular por meio da modulação de intermediários reativos derivados de catecóis. Sua atividade influencia o processamento de dopamina e de substratos relacionados de modo específico por tecido e tipo celular, associando a capacidade metabólica ao tônus de sinalização. Alterações na capacidade de sulfatação têm sido investigadas no contexto de fenótipos neuropsiquiátricos, respostas ao estresse e variabilidade no metabolismo de fármacos, tornando SULT1A3/1A4 marcadores úteis para estudar a heterogeneidade metabólica.

SULT1A3/1A4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SULT1A3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SULT1A3/1A4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SULT1A3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SULT1A3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SULT1A3/1A4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SULT1A3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SULT1A3/1A4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SULT1A3/1A4 em células tumorais com expressão de SULT1A3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.