striatin Double Nickaseプラスミド (h): sc-406215-NIC

ヒトSTRNは、STRIPAK（striatin-interacting phosphatase and kinase）複合体に属するカルモジュリン結合性の足場タンパク質ストリアチンをコードしており、PP2A関連シグナル伝達、キナーゼ制御、ならびに細胞膜や細胞間接着部位における多タンパク質複合体の形成を協調的に制御します。これらの相互作用を通じて、ストリアチンはカルシウム依存性の入力シグナルを、細胞骨格ダイナミクス、細胞極性、小胞輸送、増殖関連のシグナルネットワークを制御する経路と統合することに寄与します。STRN/STRIPAK機能の変化は、がん原性経路の再配線や組織特異的恒常性に関わる状況において、シグナル伝達と接着構造の制御異常と関連づけられています。これらの特性により、STRNはヒト細胞における足場タンパク質を介した経路間クロストークや、ホスファターゼ—キナーゼのバランスを解析するための有用な標的となります。

striatin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における STRN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、STRN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、STRNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、STRNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。