STK33 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-404127-LAC

STK33 codifica uma proteína quinase de serina/treonina implicada na regulação de redes de sinalização intracelular que coordenam a progressão do ciclo celular, a dinâmica do citoesqueleto e as respostas ao stress celular. Como quinase, a STK33 pode modular vias dependentes de fosforilação que influenciam programas transcricionais e a estabilidade de proteínas, ligando sinais a montante a alterações a jusante na proliferação e na sobrevivência. Alterações na expressão ou na atividade de STK33 têm sido investigadas no contexto de dependências de sinalização oncogénica e de controlo aberrante do crescimento em múltiplos modelos tumorais. Estas características fazem da STK33 um alvo útil para estudos mecanísticos da sinalização regulada por quinases, do crosstalk entre vias e de vulnerabilidades dependentes do genótipo em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais STK33 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de STK33 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais STK33 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição STK33, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de STK33. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo STK33 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.