Stim2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431161

Descripción general

Stim2 (molécula 2 de interacción estromal) es un sensor de Ca2+ del retículo endoplásmico que acopla el agotamiento de las reservas de Ca2+ del RE con la entrada de calcio operada por depósitos (SOCE) al regular la actividad de los canales Orai en las uniones entre el RE y la membrana plasmática. En células de ratón, STIM2 ayuda a mantener los niveles basales de Ca2+ citosólico y ajusta la amplitud y la duración de la señalización dependiente de Ca2+, lo que influye en la transcripción mediada por NFAT, la función sináptica y los programas de activación de células inmunitarias. A través de estas redes de señalización del calcio, Stim2 se vincula a procesos como la excitabilidad y la plasticidad neuronales, las respuestas de citocinas y la adaptación al estrés celular. La SOCE desregulada y la señalización dependiente de STIM2 se han implicado en mecanismos relevantes para enfermedades como la neuroinflamación, la autoinmunidad y la alteración de vías de supervivencia celular, lo que convierte a Stim2 en un objetivo útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Stim2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Stim2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Stim2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Stim2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Stim2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Stim2 para la investigación de la señalización de Stim2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Stim2 críticos para la función de Stim2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Stim2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Stim2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Stim2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Stim2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Stim2 (m) y el plásmido HDR Stim2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Stim2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Stim2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.