STEP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-407340-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- STEPO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase STEP (h) e o Plasmídeo Double Nickase STEP (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PTPN5. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:STEP Anticorpo (F-9): sc-514678
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
STEP Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-407340-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
STEP Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-407340-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
A fosfatase de tirosina proteica não receptora tipo 5 (PTPN5), também conhecida como STEP, é uma fosfatase enriquecida no cérebro que modula a sinalização sináptica ao desfosforilar substratos neuronais-chave, como as MAPKs ERK1/2 e proteínas associadas ao receptor NMDA. Ao controlar o tráfego e a atividade de receptores glutamatérgicos dependentes de fosforilação, a STEP influencia a plasticidade sináptica e a sinalização relacionada à aprendizagem e à memória. A atividade da PTPN5 se cruza com as vias de MAPK/ERK e de endocitose de receptores, moldando respostas neuronais dependentes de estímulo. A desregulação da sinalização da STEP tem sido associada a alterações da função sináptica em contextos de pesquisa sobre doenças neurodegenerativas e neuropsiquiátricas, tornando a PTPN5 um alvo útil para dissecar mecanismos de circuitos dependentes de fosfatases.
STEP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PTPN5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PTPN5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PTPN5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PTPN5 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.