Stat5b Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423179-ACT

A Stat5b (transdutor de sinal e ativador de transcrição 5B) de camundongo é um fator de transcrição responsivo a citocinas e hormônios, ativado a jusante das quinases JAK após a sinalização por receptores como o do hormônio do crescimento e múltiplas interleucinas. Após fosforilação em tirosina, a STAT5B dimeriza, transloca-se para o núcleo e regula programas gênicos que controlam proliferação, sobrevivência, diferenciação e homeostase metabólica, com papéis proeminentes no desenvolvimento e na função de células imunes. Stat5b integra-se ao crosstalk da via JAK/STAT com as sinalizações PI3K–AKT e MAPK para moldar saídas transcricionais dependentes do contexto. A atividade desregulada de STAT5B está associada a fenótipos hematopoéticos e imunes aberrantes e tem sido amplamente estudada em modelos de inflamação e de sinalização oncogênica.

Stat5b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Stat5b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Stat5b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Stat5b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Stat5b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Stat5b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Stat5b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Stat5b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Stat5b em células tumorais com expressão de Stat5b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.