ST8Sia III Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407120-ACT

ST8SIA3 codifica a ST8Sia III, uma α2,8-sialiltransferase residente no Golgi que alonga cadeias de ácido siálico em glicoproteínas e glicolipídios para gerar glicanos polissialilados. Ao remodelar a glicosilação na superfície celular e no meio extracelular, a ST8Sia III influencia a organização da membrana, as interações de receptores e a comunicação célula–célula, com efeitos a jusante sobre programas de adesão, migração e diferenciação. Assinaturas de sialilação alteradas são frequentemente observadas no câncer e na desregulação imune, e a expressão de ST8SIA3 tem sido associada a mudanças na invasividade de células tumorais e em fenótipos de sinalização. Assim, este gene é relevante para estudos da regulação, dependente de glicosilação, de vias de desenvolvimento e de transições de estado celular associadas a doenças.

ST8Sia III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ST8SIA3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ST8Sia III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ST8SIA3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ST8SIA3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ST8Sia III. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ST8SIA3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ST8Sia III no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ST8Sia III em células tumorais com expressão de ST8SIA3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.