Plásmido CRISPR de Activación (h) St3Gal-III: sc-406298-ACT

ST3GAL3 codifica la sialiltransferasa humana St3Gal-III, una enzima residente del aparato de Golgi que cataliza la transferencia de ácido siálico en un enlace α2,3 sobre glicoconjugados que contienen galactosa. Al configurar los patrones de sialilación terminal en glicanos N- y O-ligados y en glicolípidos, St3Gal-III influye en el tráfico de glicoproteínas, el reconocimiento célula–célula, la dinámica de señalización de receptores y los epítopos de carbohidratos con función inmunomoduladora. Esta actividad vincula a ST3GAL3 con procesos más amplios de glicosilación y de la vía secretora que regulan la adhesión y la migración mediante la remodelación del glicoma de la superficie celular. Las alteraciones genéticas o regulatorias de ST3GAL3 se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con firmas de glicanos modificadas relevantes para la biología de enfermedades, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de vías dependientes de la sialilación.

St3Gal-III El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ST3GAL3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

St3Gal-III El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ST3GAL3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ST3GAL3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de St3Gal-III. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ST3GAL3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de St3Gal-III en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía St3Gal-III en células tumorales con expresión de ST3GAL3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.