St3Gal-III CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406298-ACT

ST3GAL3は、ヒトのシアル酸転移酵素St3Gal-IIIをコードしており、ゴルジ体に局在する酵素として、ガラクトースを含む複合糖質に対してα2,3結合でシアル酸を転移する反応を触媒します。St3Gal-IIIは、N結合型・O結合型糖鎖および糖脂質の末端シアリル化パターンを形成することで、糖タンパク質の輸送、細胞間認識、受容体シグナル伝達のダイナミクス、ならびに免疫調節性の糖鎖エピトープに影響を与えます。この活性により、ST3GAL3は細胞表面グライコームの改変を介して接着や遊走を制御する、より広範な糖鎖修飾および分泌経路のプロセスと結び付けられます。ST3GAL3の遺伝学的あるいは制御上の異常は、神経発達に関わる表現型や、疾患生物学に関連する糖鎖シグネチャーの変化と関連付けられており、シアリル化依存性経路の機序研究における有用な標的となっています。

St3Gal-III CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ST3GAL3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

St3Gal-III CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ST3GAL3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はST3GAL3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性St3Gal-IIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のST3GAL3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSt3Gal-III依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびST3GAL3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSt3Gal-III経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。