SRPK1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402855-LAC

A SRPK1 humana (serine/argininine-rich protein-specific kinase 1) é uma quinase de serina/treonina conservada que fosforila fatores de splicing SR, coordenando a montagem do spliceossomo e regulando o splicing alternativo de pré‑mRNA. Ao controlar o tráfego núcleo‑citoplasmático dependente de fosforilação e a atividade de reguladores de splicing, a SRPK1 integra sinais de vias de sinalização com programas de processamento de RNA que influenciam a progressão do ciclo celular, respostas ao estresse e a fidelidade da expressão gênica. Alterações na atividade da SRPK1 e nos padrões de fosforilação de proteínas SR têm sido associadas a redes de splicing desreguladas observadas na biologia do câncer, na sinalização angiogênica e em fenótipos de processamento de RNA relevantes para neurodegeneração. Como um nó de via que conecta sinalização por quinases à seleção de isoformas de transcritos, a SRPK1 é frequentemente estudada em mecanismos de controle do splicing, fosforregulação proteômica e genômica funcional com resolução de isoformas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SRPK1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SRPK1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SRPK1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SRPK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de SRPK1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SRPK1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.