SREBP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423153-ACT

O gene Srebf2 em camundongo codifica a proteína 2 de ligação ao elemento regulatório de esteróis (SREBP-2), um fator de transcrição ancorado à membrana que é ativado por proteólise em resposta à redução dos níveis intracelulares de esteróis. A SREBP-2 ativada transloca-se para o núcleo para induzir genes que regulam a biossíntese e a captação de colesterol, incluindo componentes centrais da via do mevalonato e a homeostase do colesterol mediada pelo receptor de LDL. Esse eixo regulatório coordena a disponibilidade de lipídios com a biogênese de membranas e a remodelação metabólica, fazendo interface com a sinalização de estresse do RE e com o controle por feedback do sensoriamento de esteróis. A atividade desregulada de SREBP-2 tem sido associada a fenótipos de metabolismo lipídico alterados e contribui para estudos mecanísticos de vias relevantes para doenças cardiometabólicas e hepáticas em modelos murinos.

SREBP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Srebf2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SREBP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Srebf2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Srebf2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SREBP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Srebf2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SREBP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SREBP-2 em células tumorais com expressão de Srebf2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.