SPPL3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-414174

Visão geral

A peptidase de peptídeo sinal semelhante 3 (SPPL3) é uma protease aspártica intramembranar da família GxGD que cliva proteínas de membrana do tipo II na via secretória. Ela contribui para o desprendimento (shedding) do ectodomínio proteico e regula o processamento de múltiplos substratos, influenciando o tráfego associado ao Golgi e ao retículo endoplasmático (RE), a maturação de glicoproteínas e a apresentação, na superfície celular, de proteínas de membrana. A atividade da SPPL3 tem sido associada ao controle da N-glicosilação ao modular a abundância e a localização de glicosiltransferases, conectando-a à proteostase e ao controle de qualidade de proteínas de membrana. A desregulação desses processos é relevante para estudos de sinalização imune, inflamação e alterações associadas ao câncer na glicosilação e na função de receptores de superfície celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SPPL3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SPPL3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SPPL3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SPPL3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SPPL3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SPPL3 para a investigação da sinalização de SPPL3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SPPL3 críticos para a função SPPL3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SPPL3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SPPL3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SPPL3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SPPL3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SPPL3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SPPL3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SPPL3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SPPL3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.