SphK1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401274-NIC

SPHK1はスフィンゴシンキナーゼ1（SphK1）をコードしており、スフィンゴシンをリン酸化してスフィンゴシン-1-リン酸（S1P）を産生する脂質キナーゼです。S1Pは細胞の生存、増殖、遊走、炎症性シグナル伝達に影響を及ぼす生理活性スフィンゴ脂質です。SphK1は、アポトーシス促進性のセラミド／スフィンゴシンと生存促進性のS1Pのバランスを変化させることで、いわゆるスフィンゴ脂質レオスタットに関与し、増殖因子やサイトカイン経路からの入力を統合します。SphK1によって産生されたS1Pは細胞内で作用するほか、S1P受容体を介してMAPK/ERK、PI3K/AKT、NF-κB、ならびに血管新生応答などの下流プログラムを調節します。SPHK1/S1Pシグナルの破綻は、がん化に関連する表現型、線維化、免疫介在性炎症と関連づけられており、疾患関連シグナル伝達ネットワークにおける重要なノードとして広く研究されています。

SphK1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SPHK1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SPHK1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SPHK1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SPHK1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。