SphK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423102

概要

Sphk1 はスフィンゴシンキナーゼ1（SphK1）をコードしており、スフィンゴシンをリン酸化してスフィンゴシン-1-リン酸（S1P）を産生する主要な脂質キナーゼである。これにより、細胞生存を促進するS1Pと、アポトーシスを促進するセラミド／スフィンゴシンのプールとのバランスが調節される。SphK1により駆動されるS1Pシグナルは、GPCRや受容体型チロシンキナーゼの経路と交差し、MAPK/ERK、PI3K/AKT、NF-κB、カルシウムフラックス、細胞骨格の再構築に影響を与える。これらが総合的に、増殖、アポトーシス抵抗性、遊走、炎症応答を制御する。マウス系では、SphK1は免疫調節、血管生物学、ストレス応答における生理活性スフィンゴ脂質代謝を検証するために広く用いられており、炎症、線維化、がん関連表現型などのモデルにも利用される。SPHK1/S1P軸の活性変化は、サイトカイン産生、バリア機能、腫瘍関連シグナルの破綻としばしば関連し、機序解明を目的とした経路研究において重要なノードとなる。

SphK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSphk1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sphk1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sphk1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SphK1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SphK1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sphk1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SphK1の機能に不可欠なSphk1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sphk1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SphK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSphK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sphk1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SphK1 HDRプラスミド（m）および SphK1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSphk1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSphk1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。