SphK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423102

Descripción general

Sphk1 codifica la esfingosina quinasa 1 (SphK1), una quinasa lipídica clave que fosforila la esfingosina para generar esfingosina-1-fosfato (S1P), modulando así el equilibrio entre la S1P promotora de supervivencia y los reservorios de ceramida/esfingosina proapoptóticos. La señalización de S1P impulsada por SphK1 se entrecruza con vías de GPCR y de receptores tirosina quinasa para influir en MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB, el flujo de calcio y la remodelación del citoesqueleto, que en conjunto regulan la proliferación, la resistencia a la apoptosis, la migración y las respuestas inflamatorias. En sistemas murinos, SphK1 se utiliza ampliamente para investigar el metabolismo de esfingolípidos bioactivos en la regulación inmunitaria, la biología vascular y las respuestas al estrés, incluidos modelos de inflamación, fibrosis y fenotipos relacionados con el cáncer. La actividad alterada del eje SPHK1/S1P se vincula con frecuencia a una producción desregulada de citocinas, a la función de barrera y a la señalización asociada a tumores, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SphK1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sphk1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sphk1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sphk1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SphK1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sphk1 para la investigación de la señalización de SphK1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sphk1 críticos para la función de SphK1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sphk1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SphK1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SphK1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sphk1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SphK1 (m) y el plásmido HDR SphK1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sphk1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sphk1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.