SPACA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406974

Übersicht

SPACA1 (sperm acrosome associated 1) kodiert ein akrosomales Protein, das an der Morphogenese des Spermienkopfes sowie an der Biogenese und Organisation der Akrosomenmembranen während der Spermiogenese beteiligt ist. Seine Funktion steht im Zusammenhang mit Differenzierungsprozessen männlicher Keimzellen, die eine koordinierte Vesikeltrafficking‑Aktivität, Membranumbau und Zytoskelettorganisation erfordern, um die Akrosombildung und die Befruchtungsfähigkeit zu gewährleisten. Eine veränderte SPACA1‑Aktivität wurde in experimentellen Modellen mit Defekten der Spermienstruktur und einer verminderten männlichen Fertilität in Verbindung gebracht und ist daher für die Untersuchung von Mechanismen spermatogener Störungen relevant. Als im Hoden angereicherter Faktor eignet sich SPACA1 zudem als Marker und funktioneller Knotenpunkt in Signalwegen, die die Gametenentwicklung und die Reproduktionsbiologie steuern.

Das SPACA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SPACA1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SPACA1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SPACA1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPACA1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SPACA1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPACA1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SPACA1-Exone abzielen, die für die SPACA1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SPACA1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPACA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPACA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SPACA1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPACA1 HDR-Plasmid (h) und SPACA1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SPACA1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SPACA1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.