SPA-L3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-411666-LAC

SIPA1L3 codifica a proteína 3 semelhante à proteína 1 associada à proliferação induzida por sinal (SPA-L3), um andaime associado à via Rap/Ras que conecta a sinalização de pequenas GTPases à remodelação do citoesqueleto e a programas de adesão celular. Por meio de seus domínios modulares de interação, a SPA-L3 está implicada na coordenação da dinâmica da actina, do tráfego de membranas e da organização juncional — processos que moldam a polaridade celular e a arquitetura dos tecidos. A desregulação da sinalização Rap/Ras e o controle alterado do citoesqueleto são características recorrentes na progressão tumoral e em fenótipos invasivos, tornando o SIPA1L3 um nó útil para estudar o acoplamento entre sinalização e estrutura. No sistema nervoso, arcabouços de sinalização relacionados sustentam o crescimento de neuritos e a organização sináptica, fornecendo contexto adicional para investigar mecanismos do desenvolvimento e neurobiológicos.

As Partículas de Ativação Lentivirais SPA-L3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SIPA1L3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SPA-L3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SIPA1L3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de SPA-L3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SIPA1L3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.