Sp8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401546-ACT

SP8は、GCリッチな制御配列に結合して遺伝子発現プログラムを制御するSp8亜鉛フィンガー転写因子をコードしており、ヒト胚発生の過程で重要な役割を担います。Sp8は、WNT/β-カテニンをはじめとするモルフォゲン駆動性シグナル伝達や関連する発生経路と接続する転写ネットワークを協調的に制御することで、神経外胚葉や頭蓋顔面の発生などを含むパターニングおよび分化過程に関与しています。SP8活性の変化や標的遺伝子ネットワークの破綻は、先天奇形の表現型や発生関連遺伝子制御の異常と関連づけられており、系譜（リネージ）決定や形態形成の研究において重要です。核内のDNA結合性制御因子として、Sp8は分化系における転写回路やエンハンサー—プロモーター制御をマッピングするための結節点（ノード）としてもしばしば用いられます。

Sp8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SP8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sp8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SP8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSP8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sp8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSP8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSp8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSP8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSp8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。