Sox2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423086-ACT

Sox2 codifica um fator de transcrição com domínio HMG (high-mobility group) box que atua como regulador central da pluripotência e da especificação de linhagens no embrião de camundongo e em compartimentos de células-tronco adultas. O SOX2 coopera com OCT4 e NANOG para controlar a acessibilidade da cromatina e programas transcricionais que mantêm a autorrenovação, ao mesmo tempo que restringem a diferenciação precoce, com papéis de destaque na manutenção de progenitores neurais e no desenvolvimento de órgãos sensoriais. Ele participa de redes regulatórias de genes do desenvolvimento que se cruzam com as vias de sinalização Wnt/β-catenina, FGF/ERK, BMP e Notch para coordenar decisões de destino celular. A expressão desregulada de SOX2 está associada a anomalias do desenvolvimento e é frequentemente implicada na “stemness” oncogênica, tornando-o relevante para modelar, in vitro, defeitos de diferenciação e estados transcricionais semelhantes aos tumorais.

Sox2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sox2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sox2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sox2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sox2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox2 em células tumorais com expressão de Sox2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.